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买一送一|小鼠基因型鉴定试剂盒

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发表时间:2023-09-12 10:10作者:鼠来宝实验动物

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武汉有度生物科技有限公司开发的“小鼠基因型鉴定试剂盒”获得了众多客户的好评,现优惠促销“499元/100次,买一送一”,活动至9月30日,欢迎咨询!

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小鼠基因型鉴定试剂盒说明书

Mouse Genotyping Kit Manual


产品简介

本产品包含DNA粗提取及PCR扩增的整套试剂,适用于小鼠基因型快速鉴定。该产品可从小鼠尾巴、脚趾或耳朵等组织中快速提取基因组DNA,无需进行组织匀浆、DNA的抽提沉淀、吸附柱法或磁珠法纯化等操作,产物直接用于PCR扩增,显著简化实验流程。


表1 基因型鉴定试剂盒产品明细

序号

组分

YDG01-20

YDG01-100

YDG01-500

保存温度

1

Lysis Buffer*

1 mL

5 mL

25 mL

室温

2

Proteinase K

60 μL

300 μL

1.5 mL

-20℃

3

2 × Taq Mix (with Dye)

0.2 mL

1 mL

5 mL

-20℃

* 该组分低温时会出现结晶,37℃水浴加热或室温溶解至澄清透明状即可使用,后续置于室温保存。


操作流程

1. DNA提取

1.1 采样:鼠尾尖2~3 mm,鼠耳2~5 mm2,脚趾1枚。采样后若不立即进行样品消化,需保存于-20℃或更低温度,在消化前避免反复冻融。

1.2 消化液配制:每个样本按照47 μL Lysis Buffer和3 μL Proteinase K配制样本消化液。

1.3 样本消化:确保消化液完全浸没样本后,可选择以下方法进行样本的消化。

表2 消化方式


仪器

操作

方法一

烘箱

55℃过夜消化

方法二

恒温摇床

56℃,250 rpm消化10 min,涡旋混匀仪振荡10 s

1.4 灭活:消化完成的样本,于PCR仪99 ℃处理10 min以灭活蛋白酶K,随后冷却至室温或4℃。

1.5 稀释:灭活完成的样本加130 μL的ddH2O以稀释DNA,随后混匀,2000 rpm离心1 min将消化剩余的毛发、骨头等固态杂质离心于管底,后续PCR试验取上清作为模板。

1.6 保存:提取的DNA产物可短期保存于4 ℃,长期可置于-20 ℃或更低温度,避免反复冻融。


2. PCR扩增

表 3 PCR体系

Reaction Component

Volume (µL)

Genomic DNA

1

2× Taq Mix (with Dye)

10

Forward Primer (10 μmol/L)

0.5

Reverse Primer (10 μmol/L)

0.5

ddH2O

补足至20

2.1 引物:上下游引物可预混到一起作为Primer mix,使用时加1 µL即可。

2.2 PCR mix:建议先配制预混液,即将ddH2O、2× Taq Mix和Primer mix预混。建议计算约5%富余量,例如100份样品配制105份试剂。

2.3 加样:将19 µL PCR mix分装至PCR八连管或96孔PCR板后,再分别加入1 µL DNA上清。

2.4 混匀:扣紧管盖或封膜后涡旋振荡5 sec,离心10 sec。

2.5 上机:使用普通PCR仪进行扩增。根据自身需求选择表4的Touchdown程序或表5的常规PCR程序。


表4 Touchdown程序

Step

Temp

Time

Note

1

95 °C

5 min

Denature

2

95 °C

20 sec

Step3: -0.5℃ per cycle decrease.

Repeat steps 2-4 for 10 cycles

3

60 °C

20 sec

4

68 °C

1 min / 1 kb

5

95 °C

20 sec

Repeat steps 5-7 for 26 cycles

6

55 °C

20 sec

7

72 °C

1 min / 1 kb

8

72 °C

5 min

Post extension

9

10 °C

2 min

Hold


表5 常规PCR程序

Step

Temp

Time

Note

1

95 °C

5 min

Denature

2

95 °C

20 sec

Repeat steps 2-4 for 35 cycles

3

?*

20 sec

4

72 °C

1 min / 1 kb

5

72 °C

5 min

Post extension

6

10 °C

2 min

Hold

* 根据设计的引物选择合适的退火温度,通常为引物Tm值减5℃。


2.6 电泳:PCR产物可根据条带大小,选择不同浓度的凝胶进行电泳,后续根据电泳结果进行基因型分析。


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