DNA回收纯化试剂盒说明书

DNA Purification Kit Manual

产品概述

本试剂盒采用优化的硅胶柱纯化技术，可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段，此外，本试剂盒又可直接从PCR产物、酶促反应体系或其它各种方法获得的DNA粗制品中纯化DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可确保在10 - 15 min完成纯化工作。纯化的DNA可直接用于连接、转化、酶切、体外转录、PCR、测序、微注射等分子生物学研究。

产品组分

*使用前按瓶上指定体积加入无水乙醇

保存条件

15 ~ 25°C保存，室温运输。

使用方法

首次使用前按Buffer PW试剂瓶标签所示，加入160 mL的无水乙醇稀释Buffer PW，于室温保存。

一、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段

1. DNA电泳结束后，在紫外灯下快速切下含目的DNA片段的凝胶，建议用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎，并尽量去除多余的凝胶。称取凝胶重量(去除空管重量)，100 mg凝胶等同于100 μL体积，作为一个凝胶体积。加入等倍体积Buffer GDP。50 ~ 55°C水浴7 - 10 min，根据凝胶大小适当调整时间，确保凝胶块完全溶解。水浴期间颠倒混匀2次加速溶胶。

2. Buffer GDP加入1 - 3倍体积不影响DNA回收率。若回收小于或等于100 bp DNA片段时，加入3倍体积Buffer GDP，水浴溶胶后，再加入1倍凝胶体积异丙醇，混匀后再按第3步进行操作。短暂离心收集管壁上的液滴。将FastPure DNA Mini Columns-G吸附柱置于Collection Tubes 2 mL收集管中，把≤700 μL溶胶液转移至吸附柱中，12,000 rpm (13,800 × g)离心30 - 60 sec。若溶胶体积>700 μL，把吸附柱置回收集管中，剩余的溶胶液转移至吸附柱中，12,000 rpm(13,800 × g)离心30 - 60 sec。

3. 弃滤液，把吸附柱置于收集管中。加入300 μL Buffer GDP至吸附柱中，静置1 min，12,000 rpm(13,800 × g)离心30 - 60 sec。

4. 弃滤液，把吸附柱置于收集管中。加入700 μL Buffer PW(已加入无水乙醇)至吸附柱中。12,000 rpm(13,800 × g)离心30 - 60 sec。

▲请沿吸附柱壁四周加入Buffer PW，或加入Buffer PW后盖盖颠倒混匀2 - 3次有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。

5. 重复步骤5。

▲两次使用Buffer PW冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。

6. 弃滤液，把吸附柱置回收集管中。12,000 rpm (13,800 × g)离心2 min。

7. 将吸附柱置于新1.5 mL灭菌的离心管中，加入20 - 30 μL Buffer EB至吸附柱中央，放置2 min。12,000 rpm (13,800 × g)离心1 min。弃去吸附柱，把DNA保存于-20°C。

▲若需要获得最高产量，建议将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复第7步进行二次洗脱。回收大于3 kb的片段时，建议将Buffer EB预热至55°C以提升回收效率。

二、从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA

1. 短暂离心PCR产物，酶促反应液，或粗制DNA产物(包括基因组DNA)。用移液枪测量其体积，并转移至灭菌的1.5 mL或2 mL离心管中。若样品体积小于100 μL，用灭菌水补充至100 μL。高浓度的基因组DNA最好用灭菌水稀释至300 μL，以提高回收效率。

2. 加入5倍体积的Buffer GDP，颠倒或涡旋混匀。若需回收小于100 bp DNA片段，需再加入1.5倍体积(样品+Buffer GDP的体积)的无水乙醇。

3. 将吸附柱套在收集管中。把≤700 μL溶胶液转移至吸附柱中。12,000 rpm (13,800 × g)离心30 - 60 sec。若混合液体积>700 μL，把吸附柱置回收集管中，剩余的溶液转移至吸附柱中，12,000 rpm (13,800 × g)离心30 - 60 sec。

4. 后续步骤按实验“一”的第4 - 7步进行操作。

注意事项

1. 试剂盒内组分若产生沉淀，使用前可室温放置一段时间，必要时可于37°C水浴锅预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

2. 提前将水浴锅温度设至50 ~ 55°C。

3. 在步骤1中，将凝胶切成小碎块可大大缩短凝胶溶化时间从而提高回收率(线型DNA长时间暴露在高温条件下易于水解)。勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。

4. 在步骤2中凝胶必须完全溶化，否则将严重影响DNA回收率。

5. 将Buffer EB或ddH₂O加热至55°C，有利于提高DNA洗脱效率。DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0 - 8.5洗脱液中保存。

实验结果示例

1. PCR产物回收

2. 凝胶回收

版本：V231009