构建CMV-IE增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-珠蛋白杂交启动子(CAG;最初来源于pCAGGS载体)和CreERTM融合基因(CreERTM;Cre重组酶融合到小鼠雌激素受体配体结合域的G525R突变体)。将该转基因导入B6CBF1供体卵子中,由此产生的雄性转基因小鼠首先在SWR背景下回交两代。接下来,将小鼠回交到C57BL/6J背景上,共5代。该转基因表达一种由Cre重组酶组成的融合蛋白,该融合蛋白与小鼠雌激素受体的配体结合域结合,修饰后可与4-羟基他莫西芬结合,但不能与内源性雌激素结合。 CAG启动子,包含鸡β肌动蛋白启动子/增强子与巨细胞病毒立即早期(CMV-IE)增强子,在大多数组织中驱动高水平的表达。在他莫昔芬的存在下,融合蛋白被运输到细胞核中,在那里Cre可以从条件修饰基因中去除loxp侧翼的片段。该转基因小鼠与携带floxed靶基因的小鼠交配时,他莫昔芬诱导的Cre介导的重组会导致后代广泛的细胞或组织中floxed序列的缺失,包括发育中的胚胎和来自转基因小鼠的培养细胞。 |